全自動(dòng)冰凍切片機(jī)操作指南：從樣本制備到安全規(guī)范  

***、儀器用途與原理概述  

全自動(dòng)冰凍切片機(jī)通過(guò)低溫冷凍（-20℃~-30℃）固定組織樣本，利用高精度切片刀將冷凍樣本切成5-10μm的薄片，適用于病理快速診斷（如術(shù)中冰凍病理）、免疫熒光染色等場(chǎng)景。其核心原理是通過(guò)低溫抑制細(xì)胞自溶，保持組織形態(tài)結(jié)構(gòu)完整。  

二、操作前準(zhǔn)備：環(huán)境與樣本預(yù)處理  

1.儀器環(huán)境要求  

溫度：實(shí)驗(yàn)室室溫控制在18-25℃，避免空調(diào)直吹儀器導(dǎo)致溫度波動(dòng)。  

電源：使用穩(wěn)壓電源，接地良好，防止靜電干擾。  

清潔：用75%乙醇擦拭切片機(jī)臺(tái)面、樣本托、刀片架，避免樣本污染。  

2.樣本預(yù)處理  

組織固定：新鮮組織需在30分鐘內(nèi)處理，去除多余脂肪和壞死組織，體積不超過(guò)1cm×1cm×0.5cm（過(guò)大易導(dǎo)致冷凍不均）。  

冷凍劑準(zhǔn)備：常用OCT包埋劑（optimalcuttingtemperaturecompound），或異戊烷+液氮（適用于特殊樣本）。  

三、詳細(xì)操作步驟：分階段標(biāo)準(zhǔn)化流程  

1.開(kāi)機(jī)與溫度設(shè)置（以LeicaCM1950為例）  

開(kāi)機(jī)順序：  

接通電源，打開(kāi)主機(jī)開(kāi)關(guān)，等待系統(tǒng)自檢（約2分鐘）。  

在觸摸屏設(shè)置冷凍艙溫度（常規(guī)-25℃）、樣本托溫度（-30℃），預(yù)冷30分鐘至溫度穩(wěn)定。  

參數(shù)校準(zhǔn)：  

校準(zhǔn)切片厚度（常用5μm，神經(jīng)組織可設(shè)為8-10μm），檢查刀架角度（推薦5°-8°，角度過(guò)大易導(dǎo)致切片褶皺）。  

2.樣本包埋與冷凍  

包埋操作：  

在樣本托上滴適量OCT，放置組織（切面朝上），用預(yù)冷鑷子調(diào)整位置，避免氣泡。  

將樣本托放入冷凍臺(tái)，快速滴加OCT覆蓋組織，直至形成均勻包埋塊（約3分鐘冷凍至固態(tài)）。  

冷凍確認(rèn)：  

輕敲包埋塊，若發(fā)出清脆聲響，表明冷凍充分；若發(fā)軟，需重新冷凍（可噴液氮輔助，但需避免直接接觸組織）。  

3.切片與展片  

裝載樣本與刀片：  

將冷凍好的樣本托固定在樣本臂上，調(diào)整位置使組織切面與刀片平行。  

安裝***次性冰凍切片刀（佩戴防割手套），調(diào)節(jié)刀片高度至剛接觸樣本表面。  

自動(dòng)切片流程：  

按下“開(kāi)始切片”按鈕，儀器自動(dòng)以設(shè)定厚度切取薄片（若切片碎裂，可能因：①樣本冷凍不充分；②刀架角度不當(dāng)；③切片速度過(guò)快）。  

用預(yù)冷載玻片輕貼切片，靠OCT黏性吸附切片（載玻片需提前在-10℃冰箱預(yù)冷）。  

4.切片后處理  

染色準(zhǔn)備：  

切片若用于HE染色，需立即放入固定液（4%多聚甲醛）固定10分鐘；若用于免疫熒光，可直接放入-80℃保存或立即染色。  

質(zhì)量檢查：  

在顯微鏡下觀察切片平整度、細(xì)胞形態(tài)（理想切片應(yīng)無(wú)裂痕、細(xì)胞無(wú)擠壓，核漿分明）。  

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